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Compatibilidad del Tissue-Tek Xpress® x120 con diagnósticos moleculares rutinarios
Entrevista con el Prof. Herbst y la Dra. Kriese en Vivantes Klinikum Neukölln.
El Tissue-Tek Xpress® x120 de Sakura es un potente instrumento que minimiza el tiempo necesario para procesar tejidos y maximiza el flujo de trabajo del laboratorio. El Prof. Herbst y la Dra. Kriese trabajan en Vivantes Klinikum Neukölln, en Berlín, y coinciden en afirmar que el procesamiento de tejidos con este instrumento no interfiere en su capacidad para llevar a cabo ensayos de diagnóstico molecular.
Vivantes Hospital Group es el mayor grupo de atención médica de propiedad estatal de Alemania y ha sido acreditado por el Colegio de Patólogos Estadounidenses (CAP), lo que lo convierte en la institución acreditada por el CAP más grande de Europa. De los cinco departamentos de Patología de Vivantes, el principal es el Instituto de Patología de Vivantes Klinikum Neukölln. Aquí se centran en tecnologías de alto rendimiento, inmunohistoquímica y patología molecular. Vivantes Klinikum Neukölln recibe más de 2000 casos de patología molecular al año para técnicas de extracción de ADN y ARN.
En su mayor parte, el laboratorio de patología molecular de Vivantes analiza el tejido a partir de bloques fijados en formalina e incluidos en parafina (FFPE). Como todos los ensayos realizados dependen de la calidad del ADN y el ARN y, en última instancia, del rendimiento de la amplificación PCR, es fundamental que el material de FFPE recibido sea de alta calidad. Vivantes utiliza dos métodos de procesamiento de tejidos: el método convencional y el procesamiento continuo, que es donde entra en acción el Tissue-Tek Xpress x120 de Sakura.
El profesor Herbst, director del Instituto de Patología del Vivantes Klinikum Neukölln de Berlín, lleva más de 16 años trabajando para Vivantes Hospital Group. Su compañera, la doctora Kriese, es jefa del laboratorio de patología molecular y trabaja para Vivantes desde hace 11 años.
En esta entrevista, el Prof. Herbst y la Dra. Kriese explican que los dos tipos diferentes de procesamiento de tejidos, convencional y continuo, no afectan a la capacidad de obtener diagnósticos claros. Comienzan explicando la importancia de la calidad y cómo se garantiza en su laboratorio antes de hablar sobre los dos métodos de procesamiento y el futuro de la patología molecular. -(1).png)
La Dra. Kriese (izquierda) y el Prof. Herbst (derecha)
La importancia de la acreditación continua y el origen del material
«El proceso de acreditación (...) de CAP», comenta el Prof. Herbst, «es una revisión de los procedimientos, la calidad y la cualificación de las personas involucradas». La acreditación de CAP se concede cada dos años. Entre las evaluaciones de CAP, Vivantes realiza y registra sus propias evaluaciones. «También participamos en pruebas de aptitud para la Iniciativa alemana de Garantía de Calidad para la Patología (QuIP)». Las pruebas de aptitud continuas son útiles, ya que mantienen una alta calidad y rendimiento en el laboratorio.
Cuando se trata de bloques FFPE y de creación de bloques, la mayoría de los bloques proceden de los laboratorios de Vivantes Hospital Group. No suelen recibir bloques de fuentes externas. Con bloques de fuentes internas se proporciona mucha información y es posible estimar la duración de la fijación. El Prof. Herbst explica que, de hecho, es algo necesario para obtener la acreditación de CAP. En cuanto a los bloques recibidos de fuentes externas, no se tiene mucha información. Sin embargo, los procesos de extracción del ADN son muy seguros. «En la mayoría de los casos», explica el Prof. Herbst, «obtenemos ADN que se puede utilizar para fines de amplificación PCR (...) y para la secuenciación de nueva generación (NGS), la principal tecnología que estamos utilizando». La Dra. Kriese añade: «Siempre hacemos una evaluación de calidad con PCR y analizamos la integridad de los ácidos nucleicos que extraemos. De esta forma, podemos evaluar de antemano el estado en el que podrían estar el proceso de amplificación y el NGS».
Método de procesamiento convencional frente a método de procesamiento continuo
Los dos métodos de procesamiento del tejido y la realización de un bloque de FFPE (convencional y continuo) no parecen influir en la calidad ni en las pruebas moleculares posteriores. Según la Dra. Kriese, no existen diferencias significativas que afecten a las pruebas que realizan en el laboratorio. Para las pruebas, el ADN aislado debe amplificarse hasta 600 pares de bases. En lo que respecta a la amplificación del ADN por encima de 600 pares de bases, la Dra. Kriese afirma que «no es necesario, ya que ninguna prueba de diagnóstico molecular necesita ADN por encima de los 600 pares de bases».
«No existen diferencias significativas que afecten a las pruebas que realizamos en el laboratorio.» – Dra. Kriese
«Lo que es crítico», señala el Prof. Herbst, «es la calidad del formol. Tiene que ser formol tamponado neutro». Además, la temperatura del fijador es un factor importante. El formol caliente mostrará un incremento significativo en la cantidad de ácido fórmico, lo que hará que el ADN y el ARN sean casi inutilizables.
«Lo que es crítico, es la calidad del formol.» – Prof. Herbst
El Prof. Herbst explica que los tiempos tanto del fijador como de la fijación desempeñan un papel crucial. «Si los productos químicos son de mayor calidad y se tratan y almacenan correctamente, todo debería ir bien». Afortunadamente, rara vez se produce una pérdida de integridad del ADN. En la mayoría de los casos, estos bloques proceden de fuentes externas o pueden haberse dañado antes de comenzar el proceso de fijación. El Prof. Herbst afirma: «Si el material no se fija correctamente y no se detiene la autolisis, las cadenas de ADN se dañarán y el ARN puede degradarse por completo».
El futuro del diagnóstico molecular
El Prof. Herbst augura un futuro en el que el campo de la patología molecular estará más automatizado. En su opinión, en 5-10 años, los técnicos no solo realizarán un sencillo panel de diagnóstico de NGS, sino una secuenciación completa del exoma. Un instituto de patología podría tener un laboratorio de patología molecular tan grande como la parte rutinaria de la histopatología, o incluso podría superarla. «Durante los últimos 10 años (...) ha habido un crecimiento exponencial en el laboratorio de diagnóstico molecular, y creo que esto continuará. Creo que es muy importante mantener la histopatología conectada a las pruebas moleculares en un solo instituto».
«Durante los últimos 10 años, ha habido un crecimiento exponencial en el laboratorio de diagnóstico molecular, y creo que continuará.» – Prof. Herbst
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